Limbal stem cells in dogs and cats their identification culture and diferentiation into keratinocytes

Abstract

Limbal epitel kök hücrelerin limbus olarak bilinen bölgede bulundukları kanıtlanmış olup normal ve hastalık durumlarındakornea epitelinin yenilenmesinden sorumludurlar. Korneanın damarsızlığının ve saydamlığının devamı, gözün homeostazisinin vebütünlüğünün korunmasında önemli role sahiptir. Bu çalışmada kedi ve köpeklerin korneal hastalıklarının tedavisinde kulanılmaküzere keratinositlere farklılaştırılan limbal kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (LMSCs) farklılaşma potansiyelleri ve kültür özellikleriüzerinde durulmaktadır. Limbus kaynaklı mezenkimal kök hücreler gebe köpek (45 gün) ve kedilerin (35 gün) istenmeyen gebeliklerininsonlandırılması ile elde edilen fötuslardan elde edilmiştir. Eksplant kültürler, kültür ortamında üçüncü pasaja kadar büyümeyebırakılmıştır. Keratinositlere farklılaştırılmış LMSCs desellülerize amniyotik membran (AM) üzerinde üç katman oluşumu sağlanana kadarüremeye bırakılmıştır. Hücrelerin karakterizasyonu her üç germ tabakasına (osteojenik, kondrojenik ve adipojenik) hücrelerin geçişiile sağlanmıştır. Histoloji ve immonohistokimyasal analizler gerçekleştirilmiş ve korneada sitokeratin 19 (CK 19) ile pansitokeratininpozitifiği gösterilmiştir. Keratinositlere ve her üç germ tabakasına dönüşüm başarı ile gerçekleştirilmiştir. Immunohistokimyasalolarak LMSCler hücre yüzey işaretleyicileri tespit edilmiş ve CD90, CD44 ve CD49 için pozitifik, CD45 ve CD11bc için ise negatifikleribelirlenmiştir. LMSCler kornea dokusunun kendi hücreleri olması sebebiyle, ileriki çalışmalarda bu hücreler kullanılarak korneaonarımından daha iyi sonuçlar alınacağı düşünülmektedir.