CHARACTERIZATION AND ISOLATION OF VERY SMALL EMBRYONIC-LIKE (VSEL) STEM CELLS OBTAINED FROM HUMAN PERIPHERAL BLOOD

Abstract

Objective: Stem cell transplantation is considered to be one of the available treatments for malign or hereditary blood diseases and bone marrow failure. Peripheral blood progenitor cells (PBPC) are widely used for this technique. Recently a new type of stem cell with a pluripotent potential has been identified. These cells, called very small embryonic-like (VSEL) stem cells, are thought to be found in peripheral blood (PB) in adult individuals. The aim of this study was to obtain and identify VSEL stem cells using a peripheral blood source. Material and Method: VSEL cells were isolated from mononuclear and erythrocyte layers obtained by using lysis and ficoll gradient methods from the materials taken from donors. The presence of NANOG, OCT4, SSEA-4 and CXCR-4 embryonal stem cell markers by flow cytometry and immunofluorescence staining was investigated. The presence of NANOG and OCT4 proteins was investigated using the Western blot method. Results: According to the flow cytometry results, the number of cells carrying the VSEL marker was higher in the debris layer than in the CD45-population. Western and immunofluorescence results showed high levels of OCT4 and NANOG expression. It was also determined that these proteins are present in both the cytoplasm and the nucleus. Conclusions: High expression of these proteins, known as pluripotent stem cell markers, in adult peripheral blood brings to mind the question of how they work in differentiated tissues. These findings strengthen the thesis of a new stem cell population that have pluripotent markers in peripheral blood and provide the basis for future clinical studies about this point.Amaç: Kök hücre (KH) nakli malin kan hastalıkları, kemik iliği yetmezlikleri ve doğumsal kan hastalıklarının tedavisinde kullanılanyöntemdir. Bu amaçla, periferik kan projenitör hücreleri (PKPH)oldukça fazla kullanılmaktadır. Son yıllarda insan embriyonik kökhücrelerinin sahip olduğu pluripotent özelliği bulunan yeni KHtürü tanımlanmıştır. Çok küçük embriyonik benzeri (VSEL) kökhücreler olarak adlandırılan bu hücrelerin, yetişkin bireyde periferik kanda (PK) bulunduğu düşünülmektedir. Bu çalışmada VSELkök hücrelerinin periferik kan kaynağı kullanarak elde edilmesi vetanımlanması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Donörlerden alınan materyallerden lizis vefikol gradient yöntemleri kullanılarak elde edilen mononükleerve eritrosit katmanınlarından, VSEL hücreleri izole edilmiştir. Flovsitometri ve immünfloresan boyama ile NANOG, OCT4, SSEA-4ve CXCR-4 embriyonal kök hücre belirteçlerinin varlığı incelenmiştir. Western blot yöntemiyle ise, NANOG ve OCT4 proteinlerinin varlığı araştırılmıştır.Bulgular: Flov sitometri sonuçlarına göre debris katmanında,VSEL belirteci taşıyan hücre sayısı CD45- popülasyonuna göredaha yüksek bulunmuştur. Elde edilen western ve immünfloresansonuçlarına göre yüksek miktarda OCT4 ve NANOG ekspresyonu görülmüştür. Aynı zamanda bu proteinlerin hücre içinde hemsitoplazmada hem de çekirdekte bulunduğu gösterilmiştir.Sonuç: Pluripotent kök hücre belirteci olarak bilinen bu proteinlerin yetişkin periferik kanında yüksek miktarda ekspresyonunun,farklılaşmış dokularda nasıl görev yaptığı sorusunu akıllara getirmektedir. Bu bulgular; periferik kanda pluripotent belirteçlertaşıyan yeni bir kök hücre populasyonu bulunduğu tezini güçlendirmekte ve bu konuda yapılacak ileriye dönük klinik çalışmalariçinde temel oluşturmaktadır.