CHARACTERIZATION AND ISOLATION OF VERY SMALL EMBRYONIC-LIKE (VSEL) STEM CELLS OBTAINED FROM HUMAN PERIPHERAL BLOOD

Abstract

Amac: Kok hucre (KH) nakli malin kan hastaliklari, kemik iligi yetmezlikleri ve dogumsal kan hastaliklarinin tedavisinde kullanilan yontemdir. Bu amacla, periferik kan projenitor hucreleri (PKPH) oldukca fazla kullanilmaktadir. Son yillarda insan embriyonik kok hucrelerinin sahip oldugu pluripotent ozelligi bulunan yeni KH turu tanimlanmistir. Cok kucuk embriyonik benzeri (VSEL) kok hucreler olarak adlandirilan bu hucrelerin, yetiskin bireyde periferik kanda (PK) bulundugu dusunulmektedir. Bu calismada VSEL kok hucrelerinin periferik kan kaynagi kullanarak elde edilmesi ve tanimlanmasi amaclanmistir. Gerec ve Yontem: Donorlerden alinan materyallerden lizis ve fikol gradient yontemleri kullanilarak elde edilen mononukleer ve eritrosit katmaninlarindan, VSEL hucreleri izole edilmistir. Flov sitometri ve immunfloresan boyama ile NANOG, OCT4, SSEA-4 ve CXCR-4 embriyonal kok hucre belirteclerinin varligi incelenmistir. Western blot yontemiyle ise, NANOG ve OCT4 proteinlerinin varligi arastirilmistir. Bulgular: Flov sitometri sonuclarina gore debris katmaninda, VSEL belirteci tasiyan hucre sayisi CD45- populasyonuna gore daha yuksek bulunmustur. Elde edilen western ve immunfloresan sonuclarina gore yuksek miktarda OCT4 ve NANOG ekspresyonu gorulmustur. Ayni zamanda bu proteinlerin hucre icinde hem sitoplazmada hem de cekirdekte bulundugu gosterilmistir. Sonuc: Pluripotent kok hucre belirteci olarak bilinen bu proteinlerin yetiskin periferik kaninda yuksek miktarda ekspresyonunun, farklilasmis dokularda nasil gorev yaptigi sorusunu akillara getirmektedir. Bu bulgular; periferik kanda pluripotent belirtecler tasiyan yeni bir kok hucre populasyonu bulundugu tezini guclendirmekte ve bu konuda yapilacak ileriye donuk klinik calismalar icinde temel olusturmaktadir.