Siklopamin Uygulanmış Gökkuşağı Alabalık (Oncorhynchus Mykiss) Lökositlerinde Bağışıklık Gen Yanıtlarının Belirlenmesi

Abstract

Bu çalışmada, gökkuşağı alabalıklarının (Oncorhynchus mykiss) ön böbrek hücrelerinden izole edilen lökositlere uygulanan siklopaminin immun sistemle ilgili genlerin sunumlarında meydan getireceği değişimler incelenecektir. Bu maksatla, 6 adet gökkuşağı alabalığı ön böbreklerinden lökositler izole edilecektir. İzole edilen lökositler 24 çukurlu kültür plaklarına 107 ml-1 olacak şekilde stoklanacaktır. Daha sonra bu kültürler karbondioksit inkubatöründe tutulacak ve her 1,4, 12 ve 24. saatlerde lökositler hasat edilerek HBSS ile yıkanacaktır. Hücreler doğrudan sıvı nitrojende dondurulacak ve sonrasında totol RNA ve cDNA örnekleri çıkarılıp β-Aktin, IL-1β, IL-8, TGF- β, IL-12 β, TNFα1, IL-10, COX-2, IL-6, TLR5, HSP 70, C3, IgM, MHC-II, iNOS, IgT, IFN1, IFN2 ve IFN regulatory factor 2 genlerinin gen sunumları qRT-PCR kullanılarak tespit edilecektir.